البدايات الحقيقية لمسيرة الفنّان سامر اسماعيل كانت في عمر مبكر على خشبة المسرح بمدينة حمص السوريةّ مسقط رأسة، وقدّم أول أدواره التلفزيونية في مسلسل "كليوباترا" (2010)، بإدارة المخرج وائل رمضان، ثم أصبح معروفاً على نطاق واسع بالنسبة للمشاهد العربي من خلال تجسيده لشخصية "عمر بن الخطّاب" (ر) في مسلسل "عمر"، وكان أوّل ممثل جسّد هذه الشخصية.
التجربة المسرحية الأولى بالنسبة له كانت مع فرقة "إشبيلية" المسرحية بحمص، حيث شارك معها بعرض "مؤتمر غاسلي الأدمغة"، وبعد حل الفرقة نتيجة صعوباتٍ مادية واجهتها، عمل سامر مع مجموعة من الشباب الحمصي على مشروع مسرحي ارتجالي أثمر عن عرض "يوم مدرسي"، ثم واصل الشباب محاولاتهم في المسرح، إلى أن قرر سامر اسماعيل الانضمام للمعهد العالي للفنون المسرحية بدمشق، ليبدأ مسيرته بشكل أكاديمي، ومن العروض التي شارك بها في المعهد: "ذيل الطاووس، رماد البنفسج.."، وهو أحد أعضاء مختبر دمشق المسرحي.